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    PCR技術(shù)

    發(fā)布時間: 2025-05-12  點擊次數(shù): 125次

    PCR(聚合酶鏈式反應(yīng))技術(shù)由美國生物化學家凱利·穆利斯于1983年發(fā)明,其核心原理是通過高溫變性、低溫退火和適溫延伸三個步驟的循環(huán),利用DNA聚合酶特異性擴增目標DNA片段。


    早期的PCR擴增受限于耐高溫酶的缺失,效率非常低,因此在科研實驗領(lǐng)域接受度并不高。

    直至1986年,水生棲熱菌來源的Taq酶的應(yīng)用,才實現(xiàn)PCR穩(wěn)定、自動化的高效擴增。

    PCR實驗技術(shù)一直以來不斷發(fā)展,例如基于普通PCR技術(shù)通過優(yōu)化反應(yīng)流程而衍生的巢式PCR、基于熱啟動酶提高擴增特異性的Hot start PCR、基于熒光檢測技術(shù)而發(fā)展qPCR、基于芯片微孔擴增實現(xiàn)更高精度分析的數(shù)字PCR等。
    一般,正常的PCR反應(yīng)過程會經(jīng)歷3個核心階段:
    1 高溫95℃解開DNA模板(熱變性)
    2 降溫45-60℃使特異性引物與單鏈DNA互補結(jié)合(退火)
    3 再次升溫至72℃,耐熱Taq DNA聚合酶沿模板從引物3'端開始合成互補鏈(延伸)
    圖片



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